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兔多克隆抗體一般制備流程與反應(yīng)原理分析
發(fā)布時(shí)間： 2020-08-13 點(diǎn)擊次數(shù)： 1896次抗體的主要功能是與抗原(包括外來(lái)的和自身的)相結(jié)合，從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲(chóng)等異物，抗體(antibody)是一種應(yīng)答抗原產(chǎn)生的、可與抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。每種抗體與特定的抗原決定基結(jié)合。這種結(jié)合可以使抗原失活，也可能無(wú)效但有時(shí)也會(huì)對(duì)機(jī)體造成病理性損害，如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生，對(duì)人體可造成危害。
兔多克隆抗體用PUMA作為抗原刺激兔機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白。PUMA Rabbit Polyclonal Antibody是通過(guò)分子生物學(xué)方法構(gòu)建了重組PUMA的表達(dá)載體,并誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)PUMA抗體的大量表達(dá)。該重組蛋白以可溶性形式存在,經(jīng)親和柱純化后對(duì)家兔進(jìn)行免疫,得到PUMA抗體(兔多抗)。
PUMA刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。一般而言，抗體按靶位點(diǎn)不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體，由多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結(jié)合的抗體就是多克隆抗體。
兔多克隆抗體一般制備流程：*抗原的準(zhǔn)備→兔子的免疫→效價(jià)檢測(cè)和終放→抗體親和純化→抗體的濃縮和保存。PUMA的表達(dá)受腫瘤抑制基因p53的調(diào)節(jié)。PUMA參與由多種信號(hào)誘導(dǎo)的p53依賴(lài)性和非依賴(lài)性細(xì)胞凋亡，并且受轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)，而不是通過(guò)翻譯后修飾。活化后，用PUMA抗凋亡相互作用的Bcl-2家族成員，從而釋放Bax蛋白和/或Bak的其然后能夠發(fā)送信號(hào)的細(xì)胞凋亡的線(xiàn)粒體。繼線(xiàn)粒體功能障礙時(shí)，胱天蛋白酶級(jí)聯(lián)被激活，終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
生化研究表明PUMA與抗凋亡Bcl-2家族成員如Bcl-xL，Bcl-2，Mcl-1，Bcl-w和A1相互作用，抑制它們與促凋亡分子Bax和Bak的相互作用。當(dāng)它們的抑制被解除時(shí)，它們導(dǎo)致Bax的易位和線(xiàn)粒體功能障礙的激活，導(dǎo)致線(xiàn)粒體凋亡蛋白細(xì)胞色素c，SMAC和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)的釋放，導(dǎo)致胱天蛋白酶活化和細(xì)胞死亡。因?yàn)镻UMA對(duì)結(jié)合Bcl-2家族成員具有高親和力，另一個(gè)假設(shè)是PUMA直接激活Bax和/或Bak，并且通過(guò)Bax多聚化觸發(fā)線(xiàn)粒體易位并且其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，各種研究表明，PUMA不依賴(lài)于與Bax/Bak的直接相互作用來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。